下游的高蛋白浓度检测  –  比如: 切向流过滤（TFF）

目前，大部分生物制药的下游工艺包括TFF，也叫做交叉流过滤或超滤/洗滤（UF/DF）,液体通过TFF过滤模块时，流向与膜包的方向是平行的，穿过膜包的那些液体就叫透过液，返回进料罐的其余液体就叫回流液。不光是进料泵，回流端的节流阀也能控制穿过膜包的透过液的流速。

切向流一般用于蛋白或核算（如RNA，DNA或寡核苷酸）的浓缩，脱盐，多级层析之间的溶剂或缓冲液的置换，或者通过分子的大小或重量来进行物质的分离。

在线测量高浓度蛋白的难点

最近几年来，在TFF工艺及其它下游的一些工艺中，蛋白的浓度变得越来越高了，传统的在线UV吸光度法已经完全无法应对这种变化要求，一般的解决办法就是从管道里取样，送到实验室里，对蛋白浓度进行稀释，然后再测量。这种方法，不但费时间，而且会延缓TFF工艺的进度，更不用说其它相关成本。optek 的双波长UV AF46 传感器，除了使用一个标准的波长（如280 nm），还可以使用另外一个波长来实时监测高浓度蛋白或其它物质。

另外一个挑战就是，蛋白浓度很高时，还会出现蛋白多聚体，或者是蛋白变色：变成微黄色，甚至棕色，如果测量时没把这些重要变化考虑在内，就可能导致测量结果有较大的偏差。AF46-VB的第二波长，可以很好的对这些干扰进行补偿。

上面的例子中，蓝色曲线表示有背景补偿的蛋白吸光度，黑色曲线是没有背景补偿的，红色曲线就是背景带来的干扰。简单起见，如果在280 nm 的波长下，有背景补偿的蛋白吸光度为1.0 AU，如果使用单一的、没有背景补偿的测量波长280 nm，对应浓度下的蛋白吸光度则接近于1.5 AU左右，将近有33%的偏差！

optek 的下游工艺解决方案

optek 专门为蛋白纯化、浓缩、灌装等工艺研发了多种波长的UV传感器，既可适用于传统不锈钢系统，也可用于一次性工艺，既可以在线测量高浓度的蛋白（可能高达500 mg/mL，大约是500 AU或500 OD），也可以在线探测微量的蛋白泄露，用户可根据自己的实际需要，选择合适的UV测量系统：

• 在蛋白组份层析洗脱过程中，测量蛋白的最高浓度
• 与那些传统的、基于离线测量、流速/体积计算、或简单的基于时间的工艺控制方法截然不同的是，我们的解决方案可以为客户实时提供TFF过滤或分离的回流液里的蛋白浓度；
• 通过在线监测透过液中目标分子的微量浓度，可以帮助用户判断膜包是否完整；
• 在灌装站或灌装区域为用户提供整个生产批次的数据记录；

上图为SUC27流通池与AF46-VB双波长UV的组装图。设计紧凑，可同时提供多个测量值信息：两个波长的UV吸光度、1个pH 值，1个电导值，1个温度值

      总而言之，相对于手动取样分析的方法，实时的过程测量值的反馈，不但能帮助用户节省时间与资金，而且能帮助用户确保产品的一致性，让整个生产过程是基于工艺的需要而不是经验来进行调整。此外，我们可以为所有的系统提供先进的6电极电导（测量范围最低为0 – 10 µS/cm，最高可到  0 – 850 mS/cm），在线的 pH值 (0到 14 pH)，以及可进行NIST追溯的校准滤光片。